Betaglukan

Søknad og prinsipp

Søknad og prinsipp This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Reagenser og løsninger
Fosfatbuffer Løs opp 13,6 g monobasisk kaliumfosfat i ca. 1900 ml vann, tilsett 70% natriumhydroksydløsning til pH er 6,5 ± 0,05, og overfør deretter løsningen til en 2000 ml målekolbe, fortynn til volum med vann blande.
Neocuproine Solution A Løs opp 40,0 g vannfritt natriumkarbonat, 16,0 g glycin og 450 mg kobbersulfatpentahydrat i ca. 600 ml vann. Overfør løsningen til en 1000 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland.
Neocuproine Solution B Løs opp 600 mg neocuproine hydroklorid i ca. 400 ml vann, overfør løsningen i en 500 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland. Kast når en gul farge utvikler seg.
Licheninsubstrat Mal 150 mg lichenin (Sigma Chemical Co., katalognummer L-6133, eller tilsvarende) til et fint pulver i en mørtel, og oppløs det i ca. 50 ml vann ved ca. 85 °. Etter at løsningen er fullført (20 til 30 min), tilsett 90 mg natriumborhydrid og fortsett oppvarming under kokepunktet i 1 time. Tilsett 15 g Amberlite MB-3, eller en tilsvarende ionebytterharpiks, og rør kontinuerlig i 30 minutter. Filtrer ved hjelp av vakuum gjennom Whatman nr. 1 filterpapir, eller tilsvarende, i en Büchner-trakt, og vask papiret med ca. 20 ml vann. Tilsett 680 mg monobasisk kaliumfosfat til filtratet, og filtrer på nytt gjennom en 0,22 µm Millipore filterpute, eller tilsvarende. Vask puten med 10 ml vann, og juster pH i filtratet til 6,5 ± 0,05 med 1 N natriumhydroksid eller 1 N saltsyre. Overfør filtratet til en 100 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland. Oppbevares ved 2 ° til 4 ° i ikke mer enn 3 dager.
Glukose standardløsning Oppløs 36,0 mg vannfri dextrose i fosfatbuffer i en 1000 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland.
Testpreparat Klargjør en løsning fra enzympreparatprøven slik at 1 ml av den endelige fortynningen inneholder mellom 0,01 og 0,02 Beta-glukanenheter. Vei prøven, overfør den til en målekolbe av passende størrelse, fortynn til volum med fosfatbuffer og bland.

Fremgangsmåte
Pipetter 2 ml Lichenin-substrat i hvert av de fire separate reagensrørene som ble gradert på 25 ml, og varm rørene i et vannbad ved 40 ° i 10 til 15 minutter for å balansere.
Etter likevekt, tilsett 1 ml fosfatbuffer til rør 1 (substratblank), 1 ml glukose standardløsning til rør 2 (glukosestandard), 4 ml neokuproin løsning A og 1 ml av testpreparat til rør 3 (enzymblankt ), og 1 ml av testpreparatet til rør 4 (prøve). Forbered et femte rør for bufferemnet, og tilsett 3 ml fosfatbuffer.
Inkuber de fem rørene ved 40 ° i nøyaktig 15 minutter, og tilsett deretter 4 ml Neocuproine Solution A til rørene 1, 2, 4 og 5. Tilsett 4 mL Neocuproine Solution B til alle fem rørene, og dekk hver med en passende størrelse glass marmor.
[FORSIKTIG: Ikke bruk gummipropper. ]
Varm rørene i et kraftig kokende vannbad i nøyaktig 12 minutter for å utvikle farge, og avkjøl deretter til romtemperatur i kaldt vann, og juster volumet av hver til 25 ml med vann. Dekk til rørene med Parafilm eller annen passende lukning, og bland ved å snu den flere ganger.
Bestem absorbansen til hver løsning ved 450 nm i 1 cm celler, med et passende spektrofotometer, mot bufferemnet i rør 5.

Beregning
Én Beta-glukanenhet (BGU) er definert som den mengden enzym som vil frigjøre reduserende sukker (som glukoseekvivalens) med en hastighet på 1 µmol / min under analysens betingelser.
Beregn aktiviteten til enzympreparatet tatt for analyse som følger:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 × 15 × µg prøve]

hvor A4 er absorbansen til prøven (rør 4), A3 er absorbansen til enzymet (rør 3), A2 er absorbansen til glukosestandarden (rør 2), A1 er absorbansen til substratemnet (rør 1), 36 er mikrogram glukose i glukosestandardløsningen, 106 er faktoren som omdanner mikrogram til gram, 180 er vekten av 1 pmol glukose, og 15 er reaksjonstiden, i minutter.

SERTIFIKAT FOR ANALYSE

* Ovennevnte informasjon er en direkte oversettelse av informasjonen som er gitt til Newgen Biotech fra produsenten av dette produktet. Dette analysesertifikatet skal brukes til informasjonsformål og er ikke ment som en erstatning for streng kvalitetskontrollanalyse av kjøperen av dette produktet.

Emballasje og lagring

Emballasjepose for fast mat, 25 kg / fat.

Oppbevares på tørre, kjøle og godt ventilerte steder borte fra sol, varme.

Innbetaling :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC og etc.