Syreprotease

Søknad og prinsipp

Denne syreproteasen brukes til å bestemme den proteolytiske aktiviteten, uttrykt som hemoglobinenheter på tyrosinbasis (HUT), av preparater avledet fra Aspergillus oryzae var og Aspergillus niger var, og den kan brukes til å bestemme aktiviteten til andre proteaser ved pH 4,7 . Testen er basert på 30-minutters enzymatisk hydrolyse av et hemoglobinsubstrat ved pH 4,7 og 40 °. Uhydrolysert substrat utfelles med trikloreddiksyre og fjernes ved filtrering. Mengden solubilisert hemoglobin i filtratet bestemmes spektrofotometrisk.

Reagenser og løsninger av syreprotease
Hemoglobin Bruk hemoglobinsubstratpulver (Sigma Chemical Co., katalognummer H2625) eller et lignende høykvalitets materiale som er fullstendig løselig i vann.
Acetatbufferløsning Løs opp 136 g natriumacetat (NaC2H3O2 · 3H2O) i tilstrekkelig vann til å lage 500 ml. Bland 25,0 ml av denne løsningen med 50,0 ml 1 M eddiksyre, fortynn til 1000 ml med vann og bland. PH i denne løsningen skal være 4,7 ± 0,02.
Substratløsning Overfør 4,0 g av hemoglobinet i et 250 ml begerglass, tilsett 100 ml vann og rør i 10 minutter for å oppløse det. Senk elektrodene til en pH-meter i løsningen, og juster kontinuerlig pH til 1,7 ved kontinuerlig omrøring ved å tilsette 0,3 N saltsyre. Etter 10 min, juster pH til 4,7 ved å tilsette 0,5 M natriumacetat. Overfør løsningen til en 200 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland. Denne løsningen er stabil i omtrent 5 dager når den er nedkjølt.
Trikloreddiksyreoppløsning Oppløs 140 g trikloreddiksyre i ca. 750 ml vann. Overfør løsningen til en 1000 ml målekolbe, fortynn til volum med vann og bland grundig.

Prøveforberedelse Løs opp en mengde av prøven i acetatbufferløsningen for å produsere en løsning som inneholder, i hver ml, mellom 9 og 22 HUT. (En slik konsentrasjon vil gi en absorbansavlesning, i fremgangsmåten nedenfor, innenfor det foretrukne området fra 0,2 til 0,5.)

Prosedyre for syreprotease
Pipetter 10,0 ml av substratløsningen i hver av en serie 25 - 150 mm reagensrør: en for hver enzymprøve og en for substratblanket. Varm rørene i et vannbad ved 40 ° i ca 5 min. Til hvert rør, unntatt substratemnet, tilsett 2,0 ml av prøvepreparatet, og begynn å timing reaksjonen i det øyeblikket løsningen er tilsatt; tilsett 2,0 ml av acetatbufferoppløsningen til substratblankrøret. Lukk rørene med nr. 4 gummipropper, og trykk forsiktig på hvert rør i 30 s mot håndflaten for å blande. Varm opp hvert rør i et vannbad ved 40 ° i nøyaktig 30 minutter, og pipetter deretter raskt 10,0 ml av trikloreddiksyreoppløsningen i hvert rør. Rist hvert rør kraftig mot proppen i ca. 40 s, og la det deretter avkjøles til romtemperatur i 1 time, og rister hvert rør mot proppen i intervaller på 10 til 12 minutter i denne perioden. Forbered enzymemner som følger: Varm opp i separate rør 10,0 ml av substratløsningen og ca. 5 ml av prøvepreparatet i vannbadet i 30 minutter, og tilsett deretter 10,0 ml av trikloreddiksyreoppløsningen til substratløsningen, rist godt i 40 s, og til denne blandingen tilsett 2,0 ml av den forvarmede prøveberedningen. Rist igjen, og avkjøl ved romtemperatur i 1 time, rist med 10 til 12 minutters mellomrom.
På slutten av 1 time, rist hvert rør kraftig, og filtrer gjennom 11 cm Whatman nr. 42, eller tilsvarende, filterpapir, og filtrer den første halvdelen av filtratet gjennom det samme papiret. Bestem absorbansen til hvert filtrat i en 1 cm celle, ved 275 nm, med et passende spektrofotometer ved å bruke filtratet fra substratemnet for å sette instrumentet til null. Korriger hver avlesning ved å trekke riktig enzymavlesning, og registrer verdien som er oppnådd som AU.
[Merk: Hvis det ikke oppnås en korrigert absorbansavlesning mellom 0,2 og 0,5, gjenta testen ved å bruke mer eller mindre av enzympreparatet etter behov.]

Standardkurveoverføring 100,0 mg L-tyrosin, kromatografisk kvalitet eller tilsvarende (Aldrich Chemical Co.), tidligere tørket til konstant vekt, til en 1000 ml målekolbe. Oppløs i 60 ml 0,1 N saltsyre. Når L-tyrosen er fullstendig oppløst, fortynn oppløsningen til volum med vann, og bland grundig. Denne løsningen inneholder 100 ug tyrosin i 1,0 ml. Forbered tre fortynninger fra denne stamløsningen for å inneholde 75,0, 50,0 og 25,0 µg tyrosin per ml. Bestem absorbansen til de fire løsningene ved 275 nm i en 1 cm celle på et passende spektrofotometer versus 0,006 N saltsyre. Forbered et plot av absorbans versus tyrosinkonsentrasjon. Bestem kurvens helling i form av absorbans per µg tyrosin. Multipliser denne verdien med 1,10, og registrer den som AS. En verdi på ca. 0,0084 skal oppnås.

Beregning av syreprotease
En HUT-enhet av proteolytisk (syreprotease) aktivitet er definert som den mengden enzym som i løpet av 1 minutt under de spesifiserte forholdene produserer et hydrolysat hvis absorbans ved 275 nm er den samme som for en løsning som inneholder 1,10 µg / ml tyrosin i 0,006 N saltsyre.
Beregn HUT per g av det opprinnelige enzympreparatet ved ligningen

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

hvor 22 er det endelige volumet av testløsningen; 30 er reaksjonstiden, i min; og W er vekten, i g, av den opprinnelige prøven som ble tatt.

[Merk: Verdien for AS er under nøye kontrollerte og standardiserte forhold 0,0084; denne verdien kan brukes til rutinearbeid i stedet for verdien oppnådd fra standardkurven, men den nøyaktige verdien beregnet fra standardkurven bør brukes for mer nøyaktige resultater og i tvilstilfeller.]

SERTIFIKAT FOR ANALYSE

Produktnavn	Syreprotease
Andre navn	Ikke relevant	Opprinnelsesland	Kina
Press	Aspergillus oryzae	Produksjonsdato	13. MAI 2019
Batchnummer	SP19050903	Utløpsdato	12. MAI 2021
Pakke	25 kg / bøtte	Mengde	100 kg
PROTOKOLL	SPESIFIKASJONER	RESULTATER	METODE
FYSISK & KJEMISK ANALYSE
Beskrivelse	brunt pulver	Oppfyller	Visuell
Lukt og smak	Karakteristisk lukt og smak	Oppfyller	Smak
Fuktighet	NMT 7%	5,1%	Fuktighetsanalysator
IDENTIFIKASJON
Identifiserbar aktivitet	Positivt for Bromelain-aktivitet	Oppfyller	Internt
AKTIVITET
Proteaseaktivitet	NLT 500.000 HUT / g	508 270 HUT / g	FCC VII
MIKROBIOLOGISK
Totalt antall bakterier Koliforme bakterier (CFU / g) Former og gjær E coli Salmonella Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa	NMT 3000 CFU / g NMT 30 CFU / g NMT 100 CFU / g Fraværende Fraværende Fraværende Fraværende	500 CFU / g 10 CFU / g 10 CFU / g Ikke funnet Ikke funnet Ikke funnet Ikke funnet	FDA BAM Online Ch.3 FDA BAM Online Ch.4 FDA BAM Online Ch. 2 FDA BAM Online Ch.4 FDA BAM Online Ch.5 FDA BAM Online Ch.12 AOAC
TUNGMETALLER
Lede Kvikksølv Kadmium Arsenikk	NMT 3 ppm NMT 0,1 ppm NMT 1 ppm NMT 1 ppm	0,21 spm 0,1 ppm 1 ppm 11ppm	USP <231> USP <231> USP <231> USP <231>
Oppbevaring: Oppbevares på et kjølig og tørt sted beskyttet mot lys, hold trommelen tett når den ikke er i bruk. Konklusjon: I samsvar med IU-standarder. Holdbarhet: Holdbarhet for Acid Protease under foreskrevne lagringsforhold og lufttett pakking vil være 2 år. Produktet OPPFYLLER ovennevnte spesifikasjoner Godkjent av RICKY H. ZHU autorisert signatær

*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of syreprotease. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Emballasje og lagring

Emballasjepose for fast mat, 25 kg / fat.

Syreprotease skal oppbevares på tørre, kjøle og godt ventilerte steder borte fra sol, varme.

Innbetaling :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC og etc.